본 발명의 미세 세포 배양 장치는 유체가 이동 가능한 제 1 미세유체유로; 상기 제 1 미세유체유로와 접하며 상기 제 1 미세유체유로보다 더 낮은 높이를 갖는 제 2 미세유체유로; 3차원 골격; 및 유체 주입을 위한 하나 이상의 주입구;를 포함하며, 제조 방법은 특정 높이의 제 1 미세유체유로와 그보다 더 낮은 높이의 제2 미세유체유로의 합집합에 해당하는 영역에 제 2 미세유체유로의 높이와 같은 높이의 미세구조물을 형성시키고; 제 1 미세유체유로에 해당하는 영역에 제 1 미세유체유로의 높이에서 상기 제 2 미세유체유로의 높이를 뺀 높이의 미세구조물을 형성시키고; 미세구조물 상에 미세유체유로 형성용 액상 물질을 도포한 후, 경화시키고; 상기 경화된 미세유체유로 형성용 물질을 기판과 접합하여 미세유체유로를 형성시키며; 제 2 미세유체유로에 3차원 골격 형성용 고분자성 물질을 주입하고; 제 1 미세유체유로에 유체를 주입함에 따라, 저비용의 간단한 공정과정을 통해 제작할 수 있고, 펌프없이도 미세채널 내부의 특정 위치에 세포 배양을 할 수 있으며, 특히 미세채널 내부 특정 영역에 세포 배양, 이동 및 분화를 위한 3차원 골격을 손쉽게 형성하여 간질액의 흐름 또는 분자의 농도 구배에 따른 세포의 이동 및 분화를 쉽고 간편하게 관찰가능한 효과를 가진다.