본 발명은 신규한 재조합 대장균 균주 및 이를 이용한 3-하이드록시프로피온산 생산 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게 본 발명은 아세테이트로부터 3-하이드록시프로피온산을 생산할 수 있는 재조합 대장균 균주 및 이를 아세테이트가 포함된 배지에 배양하여 3-하이드록시프로피온산을 생산하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 신규 재조합 대장균 균주는 아세틸코에이 카르복실화 효소(ACC) 및 말로닐코에이 환원 효소(MCR)를 과발현시킴으로써 아세테이트로부터 효과적으로 3-하이드록시프로피온산을 생산할 수 있다. 또한 본 발명의 재조합 대장균 균주는 포름산염의 산화를 통해 NADH 및 이산화탄소를 생산할 수 있도록 포름산염 탈수소효소(FDH)를 과발현시킴으로써 포름산염이 추가로 포함된 아세테이트 배지에서 3-하이드록시프로피온산의 생산성을 높일 수 있다. 본 발명의 재조합 균주를 이용하여 일산화탄소 또는 이산화탄소와 같은 C1 화합물로부터 전환된 아세테이트 또는 포름산염을 기질로 하여 3-하이드록시프로피온산을 효과적으로 생산할 수 있다.